CONSTRUCTION OF AN EXPRESSION VECTOR FOR FRAGMENTS OF HUMAN ANTI-CD3 ANTIBODIES WITH IMMUNOREGULATORY POTENTIAL
Keywords:
Monoclonal antibodies, Humanized anti-CD3 antibodies, Immunotherapy, Bacterial cloningAbstract
We built a new vector for expressing anti-CD3 human antibodies fragments (pMIRES FvFc R – Fc mutated) with imunoregulatory potential. We used cloning techniques for transfering a synthetic antibody fragment cloned in pUC 57 vector to the pMIRES FvFc R expression vector by bacterial transformation by heat shock; then preparation of plasmidial DNA in small and medium scale; as well as the digestion of the same with restriction enzymes and subsequent analysis and extraction of plasmid DNA by electrophoresis. Cloning procedure were confirmed by Sanger sequencing. This work resulted in the construction of a new cassette for expression of human anti-CD3 antibody fragments containing two mutations in the variable region and a mutation in the Fc portion, which is believed to enhance the heterologous production of the antibody. The construction of this new expression vector, with the addition of the RNA export sequence and mutations in the Fc portion, sought to contribute to the characterization and enhancement of the binding and effector characteristics of the anti-CD3 monoclonal antibodies.
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