CONSTRUÇÃO DE UM VETOR DE EXPRESSÃO PARA FRAGMENTOS DE ANTICORPOS ANTI-CD3 HUMANOS COM POTENCIAL IMUNORREGULATÓRIO
Palavras-chave:
Anticorpos monoclonais, Anticorpos humanizados anti-CD3, Imunoterapia, Clonagem bacterianaResumo
Construiu-se um novo vetor para expressão de fragmentos de anticorpos anti-CD3 humano (pMIRES FvFc R – Fc mutado) com potencial imunoregulatório. Foram utilizadas técnicas de clonagem no vetor pUC 57 e no vetor de expressão pMIRES FvFc R por meio de transformação bacteriana por choque térmico; seguida de preparação do DNA plasmidial em pequena e média escala; digestão dos mesmos com enzimas de restrição, e posterior análise e extração do DNA plasmidial por eletroforese. A clonagem foi confirmada pela técnica de sequenciamento de Sanger. Este trabalho resultou na construção de um novo cassete para expressão de fragmentos de anticorpos anti-CD3 humano contendo duas mutações na região variável e uma mutação na porção Fc, que se acredita que melhore a produção heteróloga do anticorpo. A construção deste novo vetor de expressão, com a adição da sequência de exportação de RNA e mutações na porção Fc, buscou contribuir para a caracterização e aprimoramento das características ligantes e efetoras dos anticorpos monoclonais anti-CD3.
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